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        2. 上海安亭科學儀器廠 TGL-16G TDL-5-A
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          低速離心法分離小鼠胚胎干細胞

          [導讀]上海安亭科學儀器廠介紹低速離心法分離小鼠胚胎干細胞。實驗方法供大家參考。

          方法:通過上海安亭科學儀器廠生產的TDL-5-A普通低速離心機以600r/min離心6min摔裂小鼠完整囊胚,剝離出未分化的內細胞團,培養鑒定干細胞。

          結果:利用低速離心機進行速離心可將內細胞團從完整囊胚中剝離出來,接種在絲裂霉素處理過的飼養細胞上培養時,能在2-3d獲得巢狀增殖的干細胞集落,且能反復傳代、凍存復蘇,并保持胚胎干細胞多個標志物的特征。

          結論:利用上海安亭科學儀器廠的低速離心機進行摔裂完整囊胚法可獲得胚胎f細胞系,且操作方便、經濟可行。

          飼養層細胞的制備:無菌取出妊娠13—14d的昆明小鼠鼠胚,去頭、四肢及內臟后,剪碎成約1 1'1"1/11組織塊,2.5g/L胰蛋白酶/體積分數為0.02%室溫消化20min后,加入等量PBS自然沉降。

          取上層細胞懸液轉入含體積分數為10%FBS的高糖飼養層細胞培養基中終止消化,置于低速離心機中離心后去上清,用飼養層細胞培養基重懸后,置于培養瓶中培養,常規消化、傳代或凍存備用。當培養瓶中細胞鋪滿后更換含10111g/LMMC的飼養層細胞培養基,孵育2.5h,PBS洗滌5次,消化后接種于體積分數為0.1% 明膠預處理30 min的培養瓶中培養,即得飼養層細胞。完整囊胚。置于10mL玻璃離心管內,置于離心機中以600r/min離心6 min,重懸細胞,接種于含飼養層細胞的培養瓶內,置于37℃ 、體積分數為5% CO,飽和濕度培養箱中培養。

          證明用實驗室常規用的離心機直接離心摔裂完整的胚囊是實際可行的,


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